ELISA試劑盒陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對許多標(biāo)本的試驗查看而得到的。ELISA試劑盒陽性判定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為差異效果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。

用此法差異效果央求試驗條件十分穩(wěn)定，試劑的制備有必要標(biāo)準(zhǔn)化，陽性和陰性的對照品應(yīng)符合必定的標(biāo)準(zhǔn)，須配用精細(xì)的儀器，并嚴(yán)峻按規(guī)則操作。

ELISA試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，目視法簡捷明晰，但頗具主觀性。

ELISA試劑盒試驗3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此計劃，則棄去，算了另兩個陰性對照從頭核算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上計劃，則該次試驗無效。在條件許可下，應(yīng)該用比色計測定吸光值，這么能夠得到客觀的數(shù)據(jù)。  現(xiàn)舉某種查看 HBsAg的試劑盒為例,先讀出標(biāo)本（sample，S）、陽性對照（P）、和陰性對照（N）的吸光值，然后進行核算。核算辦法有多種，大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。

測得A值后，先核算陰性對照A值的平均數(shù)（NC X ）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個特定的數(shù)值（例0.400），試驗才有用。

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