培養(yǎng)基制備原則和要求

（一）培養(yǎng)基必須含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。所用的化學(xué)藥品必須純凈，稱(chēng)取的份量務(wù)必準(zhǔn)確。
（二）培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細(xì)菌生長(zhǎng)要求。按各種培養(yǎng)基要求準(zhǔn)確測(cè)定調(diào)節(jié)pH值。多數(shù)細(xì)菌生長(zhǎng)的適宜pH值為7.2～7.6，呈弱堿性。
（三）培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和溫度，應(yīng)按照各種培養(yǎng)基的規(guī)定進(jìn)行，以保證滅菌效果及不損失培養(yǎng)基的必需營(yíng)養(yǎng)成分。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須置37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)，無(wú)菌生長(zhǎng)者方可應(yīng)用。

（四）所用器皿須潔凈，忌用鐵或鋼質(zhì)器皿，要求沒(méi)有抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的物質(zhì)存在。
（五）制成的培養(yǎng)基應(yīng)該是透明的，以便觀察細(xì)菌生長(zhǎng)性狀以及其他代謝活動(dòng)所產(chǎn)生的變化。
二、培養(yǎng)基制備過(guò)程
不同的培養(yǎng)基其制備方法也不同，一般包括以下步驟：
（一）準(zhǔn)確稱(chēng)量試劑 根據(jù)不同的菌類(lèi)和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
（二）校正pH值 將稱(chēng)量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N
NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
（三）過(guò)濾 將玻璃漏斗置鐵架上，再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。
（四）分裝 將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。
（五）滅菌
培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。

高壓蒸汽滅菌，一般采用15磅／平方（即1.05kg／cm2）壓力，此時(shí)的溫度是121.3℃。滅菌20～30分鐘后，可達(dá)到*滅菌的目的。在進(jìn)行滅菌的時(shí)候，首先要把滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排出，否則，冷空氣存在會(huì)降低鍋內(nèi)的實(shí)際溫度，影響滅菌效果。